??高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是色譜法的一個重要分支，應用范圍十分廣泛，對樣品的適用性廣，不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，包括但不限于高分子化合物、離子型化合物、熱不穩(wěn)定性化合物以及有生物活性的化合物，都能通過搭配不同檢測器的HPLC進行分離檢測。
歷史由來：
       20世紀初，俄國植物化學家茨維特（Tswett）發(fā)現(xiàn)一個特別有趣的現(xiàn)象，他將碳酸鈣填充進豎立的玻璃管，上方加入植物色素，然用石油醚淋洗，經(jīng)過一段時間洗脫之后，植物色素在碳酸鈣柱中實現(xiàn)分離，由一條色帶分散為數(shù)條平行的色帶，茨維特使用色譜法 chromatography （來自希臘字， chroma 意思是顏色， graphy 意思是記錄 - 直譯為顏色記錄）來描述他的彩色試驗。（令人好奇的是, 俄羅斯名字茨維特意思是顏色。）



圖1
       20世紀60年代末，科克蘭、哈伯、荷瓦斯、莆黑斯、里普斯克等人開發(fā)了世界上第一臺液相色譜法色譜法色譜法色譜法，開啟了色譜時代。
      工作原理：
      高效液相色譜儀由溶劑輸送系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、記錄及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。
工作時儲液器中的流動相被高壓泵壓入檢測系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入色譜系統(tǒng)，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，在其通過檢測器時，被轉(zhuǎn)換成信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式輸出。




圖2 高效液相色譜儀的系統(tǒng)組成
優(yōu)勢特點：
高效液相色譜法有“三高一廣”的特點：
①高壓：高效液相色譜儀供液和進樣壓力大，壓力為150-350bar。
②高速：分析速度快、流動相流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度要快得多，通常分析一個樣品在 15～30 分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于 1 小時。
③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔的分離效能高出許多倍。
④應用范圍廣：70%以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差的化合物分離分析，具有優(yōu)勢。
高效液相色譜儀的應用：高效液相色譜具有“三高一廣”、檢測靈敏度好、尤其適用于沸點高且熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的分析，主要被應用于醫(yī)藥、精細化工及化妝品等行業(yè)等領(lǐng)域，應用范圍較廣。在醫(yī)藥研究分析中的應用：
①分離分析藥物的組分含量；
②藥物生產(chǎn)中進行中間控制；
③分析藥物在體內(nèi)的殘量；
④測定藥物在各種器官中的代謝產(chǎn)物，特別是研究藥物的代謝產(chǎn)物在血清中存在的情況。
在化妝品行業(yè)的應用：化妝品對人體皮膚有害物質(zhì)的含量會影響個人的皮膚健康。采用液相色譜法可以測定化妝品中某些有害物質(zhì)的成分和含量。
①化妝品中禁用物質(zhì)中的應用：抗生素、激素、氫醌等；
②化妝品中防腐劑中的應用：甲基異噻唑啉酮、苯氧乙醇、尼泊金酯，再如辛酰羥肟酸等防腐劑助劑，也能進行含量的分析；
③有特定功效的化妝品原料篩查；
④化妝品中防曬劑、著色劑中的應用。

隨著科技的進步，色譜應用越來越廣泛，必定能為化妝品行業(yè)提供強有力的支撐，促進化妝品良性快速地進步。

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